In situ hibridizacija yra metodas nustatyti chromosomų nukrypimus. Tai apima konkretų ženklinimą chromosomų su milteliu dažai ir susiejant juos su DNR zondu. Ši technika naudojama prenatalinei genetinių mutacijų diagnostikai.
Kas yra in situ hibridizacija?
In situ hibridizacija apima specifinį ženklinimą chromosomų su milteliu dažai ir susiejant juos su DNR zondu. Ši technika naudojama prenatalinei diagnozei genas mutacijos. In situ hibridizacija arba fluorescencijos in situ hibridizacija susijęs su molekuliniu genetiniu aptikimu nukleorūgštys iš RNR ar DNR specifiniuose audiniuose ar ląstelėje. Paprastai tokio tipo diagnostika naudojama struktūrinei ar skaitinei chromosomų anomalijai nustatyti nėštumas. Tuo tikslu naudojamas dirbtinai pagamintas zondas, kuris pats susideda iš nukleino rūgšties. Tada jis prisijungia prie nukleorūgštys organizme bazės poravimu. Šis surišimas vadinamas hibridizacijos terminu. Aptikimas atliekamas ant gyvos paciento struktūros, todėl atitinka aptikimą vietoje. Nuo to reikia atskirti metodus in vitro, kai aptikimas atliekamas mėgintuvėlyje. Metodą XX amžiuje sukūrė mokslininkai Joe Gallas ir Mary Lou Pardue. Nuo to laiko technika tobulėjo. Pavyzdžiui, tuo metu, kai buvo naudojami radioaktyvūs zondai, milteliais pažymėti zondai, turintys kovalentinį ryšį su etiketėmis molekulės yra naudojami šiandien.
Funkcija, poveikis ir tikslai
In situ hibridizacija paprastai naudojama norint nustatyti chromosomų nukrypimus, chromosomų anomalijas, kurių negalima nustatyti kariogramoje. Taigi metodas visada naudojamas, kai paveldimos ligos turi būti nustatytos nėštumas. Kadangi chromosomų aberacijos yra problema, kurios šiandien nereikėtų nuvertinti, metodo taikymas laikui bėgant išaugo. Hibridizacija atliekama naudojant natūralias motinos ląsteles amniono skystis. Technikos pagrindas yra spalva pažymėto zondo susiejimas su DNR fragmentais. Dėka surišimo, vėliau galima naudoti mikroskopą vertinant kopijų skaičių, nes atskiros kopijos skleidžia šviesos signalą ir gali būti matomos po mikroskopu. Tam yra skirtingos procedūros. Arba analizė atliekama iškart po įrišimo. Šiuo atveju milteliniai dažai, tokie kaip biotinas naudojamas tiesiogiai prie DNR zondo. Taikant netiesioginį in situ hibridizavimo metodą, analizės negalima atlikti iškart po hibridizacijos, nes fluorescuojančios medžiagos gali prisijungti prie zondo tik po hibridizacijos. Šis netiesioginis metodas yra naudojamas dažniau nei tiesioginis metodas, nes jis laikomas jautresniu. Technikos apima chromosomoms būdingus centrometro DNR zondus, lokusui specifinius DNR zondus, chromosomoms būdingus DNR bibliotekos zondus ir lyginamąsias genomo hibridizacijas. Chromosomoms būdingų centromerų DNR zondai gali būti naudojami chromosomų skaitiniams nukrypimams nustatyti. Tai yra, jie pirmiausia naudojami dubliuojant ar ištrinant chromosomų yra įtariami. Lokusui būdingi DNR zondai daugiausia tinka nustatyti minimalias mutacijas, kurių negalima nustatyti kariogramoje. Chromosomai būdingas DNR bibliotekos zondas ypač naudojamas intarpams ir translokacijoms aptikti. Kita vertus, lyginamoji genomo hibridizacija yra išsami chromosomų medžiagos nuostolių ir prieaugio analizė. Šiandien hibridizacija in situ yra labai svarbi diagnozuojant įvairias chromosomų mutacijas. Diagnostikoje Dauno sindromas, pavyzdžiui, zondai jungiasi prie 21. chromosomos. Tam tikslui dažniausiai naudojami chromosomoms būdingi zondai, kurie gali būti naudojami įtarus šią ligą. Įtarimas gali kilti, pavyzdžiui, jei tėvai anksčiau pagimdė vaiką, sergančią šia liga ultragarsas vaizdas yra pastebimas. Jei yra trigubas, o ne dvigubas kaklaraištis, dėl kurio atsiranda trigubas spalvų signalas, diagnozė laikoma patvirtinta.
Rizika, šalutinis poveikis ir pavojai
Skirtingai nei, pavyzdžiui, PGR, in situ hibridizacija yra daug mažiau jautri užteršimui. Be to, procedūrai reikalingas laikas yra nepaprastai trumpesnis. Tačiau kadangi embrionai ypač sudaro chromosomų modelius, bet koks esamas modelis negali būti naudojamas norint tiksliai nustatyti likusias chromosomų dalis paskirstymas taigi ir kitų ląstelių genetinė būklė. Spalvoti signalai taip pat gali sutapti arba likti nematomi dėl kitų priežasčių. Taigi, in situ hibridizacija kaip diagnostinė priemonė per nėštumas yra palyginti linkusi į klaidas. Gali pasitaikyti neteisingų diagnozių ir tėvai gali nuspręsti prieš sveiką embrionas. Siekiant sumažinti in situ hibridizacijos klaidų pastebimumą, vienu metu reikia ištirti bent dvi embriono ląsteles. Tiriant dvi ląsteles lygiagrečiai, dabar yra tik nereikšminga klaidingos diagnozės rizika. Todėl tėvai tokiu atveju gali pasikliauti diagnoze. In situ hibridizacija siūloma ne kiekvienai nėščiai moteriai, o tik moterims iš rizikos grupės. Nepaisant to, nėščioms moterims negalima atsisakyti tokio tipo diagnozės jų pačių prašymu. Nenormalus ultragarsas išvados ar nenormalus serumas gali paskatinti gydytoją pasiūlyti diagnostinę procedūrą. Šiandien in situ hibridizacija gali būti naudojama diagnozuoti didelę chromosomų aberacijų dalį, tačiau jokiu būdu ne visas. Todėl hibridizacija in situ niekada negali būti atliekama atskirai, ji visada turi būti naudojama kartu su įprastu chromosomų testu. Šioje procedūroje svarbų vaidmenį vaidina nėščiosios priežiūra. Todėl prieš analizę vyksta išsami diagnostikos metodo aptarimas su būsima mama, informuojant ją apie riziką, galimybes ir technikos apribojimus.
