Vienvietisgenas analizė yra tikslinis genetinių tyrimų metodas.
Vykdant šią procedūrą, įtariant paveldimą ligą, kurią sukelia vienintelis a genas, tiriamas genas, įtariamas kaip priežastinis. Tai taip pat dažnai atliekama kaip atrankos tyrimų dalis.
Indikacijos (taikymo sritys)
- Monogeninių ligų diagnozė, pvz cistinė fibrozė.
Procedūra
Reikalinga medžiaga
- Heparino kraujas (mažiausiai 1-2 ml)
Paciento paruošimas
- Nereikalinga
Trikdantys veiksniai
- Nežinoma
Laboratorinis metodas
Dažniausiai sekos nustatymo metodas, naudojamasgenas analizė yra Sangerio metodas, dar vadinamas grandinės nutraukimo sinteze, kai pirmiausia kalbama apie DNR išskyrimą iš kraujas. Tada viskas vandenilis ryšiai, kurie padeda išlaikyti dviejų grandžių DNR kartu, yra nutrūkę. Vieną minutę pakaitinus 94–96 ° C temperatūroje, yra dvi viengijos sruogos. Toliau įvyksta vadinamoji pradų hibridizacija, kai gruntas yra prijungtas. Tai vyksta maždaug 60 ° C temperatūroje. Gruntas yra oligonukleotidas (oligomerai, sudaryti iš kelių nukleotidų), kuris yra atspirties taškas DNR replikacijai fermentai (enzimai) tokių kaip DNR polimerazė. Po grunto hibridizacijos vyksta pratęsimas, kurio metu temperatūra pakeliama iki 72 ° C. Tai leidžia gruntui prisijungti prie DNR polimerazės (fermentai (enzimai) kad sintetina DNR). Po vidutiniškai 30 ciklų procedūrą galima sustabdyti.
Tolesnę analizę atlieka kapiliaras elektroforezė automatiniuose sekvenceriuose. Rezultatas vadinamas elektroferograma. Tai rodo skirtingas spalvas, nurodančias pagrindinę seką.
Šiuo metodu gali būti aptiktos mutacijos, turinčios tik vieną geno nukleorinę bazę, taip pat žinomos kaip taškinės mutacijos.