Audinių struktūrų nustatymas, antikūnaiir patogenai imunologiniu ženklu yra populiarus, modernus ir tikslus. Imunofluorescencija reiškia imunologinį žymėjimą paruoštu fluorescuojančiu antikūnai kurie priversti švytėti UV šviesoje. Atliekant tiesioginį imunofluorescencijos nustatymą, tiriamasis substratas tiriamas tiesiogiai su liuminescenciniu antikūnai, be pirminių antikūnų ar dirbtinių antigenų.
Kas yra tiesioginis imunofluorescencijos nustatymas?
Naviko audinyje esančius naviko specifinius antigenus galima nustatyti tiesiogiai naudojant imunofluorescenciją. Taigi galima sužinoti, kurioje kūno vietoje egzistuoja metastazių atėjo iš. Tiesioginis imunofluorescencijos nustatymas yra diagnostinis metodas, pagrįstas imunologijos, imuninio dažymo ir imunohistochemijos išvadomis. Čia pagrindinis dėmesys skiriamas antikūnų gebėjimui prisijungti prie specifinių audinių vietų arba ant antigenų serume. Šios vietos yra epitopai. Biocheminėje diagnostikoje yra dirbtinių antikūnų arba imitatorių (vienaskaitos: mimetikų), kurie leidžia žymėti šiuos antikūnų ir antigenų ryšius fluorescencijos ar radioaktyvumo pagalba. Dirbtinių antikūnų konjugatai, tiesą sakant, susijungia su epitopais, kita vertus, turi fluorescencinį žymeklį imunofluorescencijos atveju. Tai yra alternatyva radioaktyviųjų žymenų naudojimui. Ypatingas tiesioginių imunofluorescencinių aptikimų bruožas, palyginti su netiesioginiais, yra tas, kad antikūnas, kuris jungiasi su antigeno epitopu tiriamoje medžiagoje, tuo pačiu metu jau yra antikūnas konjuguotas su fluorescuojančiu žymekliu. Tiesioginiam aptikimui nebūtini papildomi antikūnai, skirti įsiterpti. Imunofluorescencijos metu fluoresceinas, kuris šviečia UV šviesoje, ir fluoresceino izotiocianatas (FITC) yra naudojamas kaip dažai sukurti dirbtinių antikūnų konjugatus. Kiek tai atrodo kiek sudėtinga, tačiau tiesioginiai imunofluorescenciniai aptikimai yra standartiniai medicinos metodai laboratorinė diagnostika įvairiais medicinos klausimais. Antikūnai, turintys fluorescuojančių dažų, yra paruošti pardavimui.
Funkcija, poveikis ir tikslai
Tiesioginiai imunofluorescenciniai detektoriai yra skirti audiniams tirti, norint dažyti specifines audinio struktūras. Tačiau jie egzistuoja ir atskiroms ląstelėms. Štai čia srauto citometrija vaidina didelį vaidmenį. Galiausiai yra imunologiniai tyrimai, susidedantys iš kietos ir skystos fazių. Audinių imunofluorescencijos tyrimai yra svarbūs visų pirma onkologijoje, ty gydant Vėžys. Naviko audinyje esančius naviko specifinius antigenus galima nustatyti tiesiogiai naudojant imunofluorescenciją. Šie audinių mėginių iš navikų tyrimai dažnai yra svarbūs norint išsiaiškinti, kurioje kūno vietoje yra esama metastazių arba dėl to, kad būtų sudarytas sprendimas, ar navikas yra gerybinis, ar piktybinis. Tiriant atskiras ląsteles su tiesioginiu imunofluorescencijos nustatymu, naudojamas virusų antigenams, bakterijų antigenams ir kitiems epitopams rasti. Pavyzdžiui, sužinoma, ar ląstelės yra užkrėstos virusu ir kuriame infekcijos ciklo etape yra ląstelės. FACS (= Fluorescence-Activated Cell Sorting) yra labai efektyvus srauto citometrijos metodas, kai fluorescuojančiai pažymėtos ląstelės paskirstomos skirtingiems mėgintuvėliams, priklausomai nuo dažymo tipo. Šis metodas yra svarbus imunologijoje, Hematologija ir infektologija. Imunofluorescenciniai imuniniai tyrimai leidžia tiesiogiai aptikti aplinkos toksinus, genetiškai modifikuotus organizmus ir tam tikrus maisto priedus. Šioje eksperimentinėje sąrangoje visada yra kieta ir skysta fazė. Gausus patogenai, Įskaitant AIDSsukeliantis HI virusą, taip pat galima nustatyti tiesiogiai. Tačiau nustačius infekcinius ir autoimuninės ligos, dažnai siekiama nustatyti antikūnus, o ne antigenus. Tai yra gynyba molekulės gaminamas paties organizmo imuninė sistema. Tada tokie aptikimai nėra tiesioginiai aptikimai pagal čia pateiktą apibrėžimą, nes fluorescenciniai antikūnai susiejami ne tiesiogiai su paties kūno antigenais, bet su bandymo agregato antigenais. Šie eksperimentinio surinkimo antigenai savo ruožtu siejami su endogeniniais antikūnais. Tiesiog atliekant specialius aptikimo ir patvirtinimo testus, tiesioginiai imunofluorescenciniai aptikimai naudojami įprastoms infekcijoms, pavyzdžiui, HI virusai ir Chlamidijos. Yra daugelio kitų ligų tyrimai. Daugeliu atvejų netiesioginis antikūnų nustatymas yra geresnis užkrečiamos ligos nes kūnas imuninė sistema turi genialų sugebėjimą prisiminti ankstesnes infekcijas. Kitose situacijose tiesioginis antigenų nustatymas ir netiesioginis antikūnų nustatymas papildo vienas kitą. Pastarieji rodo, kad infekcija įvyko anksčiau, o pirmieji pateikia tikslesnę informaciją apie dabartinę patogenų aktyvumo būklę.
Rizika, šalutinis poveikis ir pavojai
Su tiesioginiu imunofluorescencijos nustatymu, kaip ir visais medicininiais atvejais, kyla dvi rizikos: klaidingai teigiamų rezultatų ir klaidingai neigiamų rezultatų rizika. Klaidingai teigiami rezultatai sukelia pacientui psichologinį diskomfortą ir labai didelį nerimą. Todėl prie teigiamų rezultatų pridedamos papildomos bandymų procedūros, ypač kai diagnozė lemia kardinalius gyvenimo pokyčius. Klaidingai neigiamo rezultato pavojus yra tas, kad pacientas laiku nesužinoja apie grėsmę savo paties sveikatai ir galbūt net visuomenės sveikatai. Todėl gerai atlikti daugybę tyrimų ir paruošti parduoti daug įvairių tiesioginių imunofluorescencinių aptikimų ir juos pasiūlyti. Tai kartu su kitais tiesioginiais ir netiesioginiais ligų ir patologijų nustatymo metodais padidina diagnozės tikslumą. Tiesioginis aptikimas pagrįstas antikūnų konjugatu, kuris, viena vertus, jungiasi prie antigenų epitopų, kita vertus, tuo pačiu metu sukelia ir fluorescenciją. Todėl toks produktas naudojamas tik atliekant vienos rūšies bandymus ir nėra naudojamas kitų tipų bandymams. Tai yra svarbus procedūrinis skirtumas nuo netiesioginio aptikimo, kai pirminiai antikūnai naudojami prieš fluorescuojančius antikūnus surišti epitopą. Taigi antikūnų konjugatas yra tinkamas skirtingiems tyrimams. Šis procedūrinis skirtumas skiriasi nuo medicininio skirtumo tarp netiesioginio antikūnų nustatymo ir tiesioginio antigenų nustatymo.
