DNR sekos
Atliekant DNR sekos nustatymą, biocheminiai metodai naudojami nustatant nukleotidų (DNR bazinės molekulės su cukrumi ir fosfatu) seką DNR molekulėje. Plačiausiai naudojamas „Sanger“ grandinės nutraukimo metodas. Kadangi DNR susideda iš keturių skirtingų bazių, atliekami keturi skirtingi metodai.
Kiekvienas metodas apima sekvenuojamą DNR, pradmenį (sekvenavimo pradinę molekulę), DNR polimerazę (DNR pratęsiantį fermentą) ir visų keturių reikalingų nukleotidų mišinį. Tačiau kiekvienu iš šių keturių būdų skirtinga bazė yra chemiškai modifikuota taip, kad ją būtų galima įterpti, bet nesuteikia DNR polimerazės veikimo taško. Tai lemia grandinės nutraukimą. Šis metodas gamina įvairaus ilgio DNR fragmentus, kurie vėliau chemiškai atskiriami vadinamąja gelio elektroforeze pagal jų ilgį. Gautą rūšiavimą galima paversti sekvenuotos DNR sekcijos nukleotidų seka, pažymint kiekvieną bazę skirtinga fluorescuojančia spalva.
DNR hibridizacija
DNR hibridizacija yra molekulinis genetinis metodas, naudojamas įrodyti dviejų atskirų skirtingos kilmės DNR grandinių panašumą. Šis metodas naudoja faktą, kad DNR dviguba grandinė visada susideda iš dviejų vienas kitą papildančių vijų. Kuo panašesnės abi pavienės sruogos viena kitai, tuo daugiau bazių sukuria tvirtą ryšį (vandenilio ryšius) su priešinga baze arba susidaro daugiau bazių porų.
Tarp dviejų DNR grandinių, turinčių skirtingą bazių seką, sekcijų nebus. Santykinį junginių skaičių dabar galima nustatyti nustatant lydymosi temperatūrą, kurioje atskiriama naujai suformuota DNR dviguba grandinė. Kuo aukštesnė lydymosi temperatūra, tuo labiau viena kitą papildančios bazės suformavo vandenilio ryšius ir tuo labiau panašios dvi atskiros gijos. Šis metodas taip pat gali būti naudojamas nustatant specifinę bazės seką DNR mišinyje. Šiuo tikslu dirbtinai suformuoti DNR fragmentai gali būti žymimi (fluorescuojančiais) dažais. Tada jie žymi atitinkamą bazinę seką ir gali ją padaryti matomą.
Visi šios serijos straipsniai:
